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第六章 综合技能训练（第1页）

第六章综合技能训练

实训一畜禽传染病的诊断方法与步骤

一、目的要求掌握传染病的诊断方法和步骤。

二、实验内容传染病的主要诊断方法及步骤。

三、方法与步骤教师按诊断步骤程序做示范。学生分组，每两人为一组，一位为临床兽医，一位为假设畜主，变换角色轮换，按照教师的示范进行实习。

及时而正确的诊断是预防工作的重要环节，它关系到能否有效地组织防疫措施。诊断家畜传染病常用的方法有临诊诊断、流行病学诊断、病理学诊断、病原学诊断和免疫学诊断等。虽然诊断的方法很多，但不是每一种传染病和每一次诊断工作都需要全面去做。由于传染病的特点各有不同，常需根据具体情况而定，有时仅需采用其中的一两种方法就可以及时作出诊断。现将各种诊断方法简介如下：

1。临诊诊断。临诊诊断是最基本的诊断方法。它是利用人的感官或借助一些最简单的器械如体温计、听诊器等直接对病畜进行检查。有时也包括血、粪、尿的常规检验。一般来说，都是简便易行的方法。对于某些具有特征临诊症状的典型病例如破伤风、放线菌病、马腺疫、猪气喘病等，经过仔细的临诊检查，一般不难做出诊断。

但是临诊诊断有其一定的局限性，特别是对发病初期尚未出现有诊断意义的特征症状的病例，对非典型病例（如无症状的隐性患者）依靠临诊检查往往难于做出诊断。在很多情况下，临诊诊断只能提出可疑疫病的大致范围，必须结合其他诊断方法才能做出确诊。在进行临诊诊断时，应注意对整个发病畜群所表现的综合症状加以分析判断，不要单凭个别或少数病例的症状轻易下结论，以防止误诊。

2．流行病学诊断。流行病学诊断是针对患传染病的动物群体，经常与临诊诊断联系在一起的一种诊断方法。某些家畜疫病的临诊症状虽然基本上是一致的，但其流行的特点和规律却很不一致。例如口蹄疫、水疱性口炎、水疱病和水疱性疹等病，在临诊症状上几乎是完全一样的，无法区别，但从流行病学方面却不难区分。

流行病学诊断是在流行病学调查（即疫情调查）的基础上进行的。疫情调查可在临诊诊断过程中进行，如以座谈方式向畜主询问疫情，并对现场进行仔细观察、检查，取得第一手资料，然后对材料进行分析处理，做出诊断。调查的内容或提纲按各种不同的疫病和要求而制定，一般应弄清下列有关问题。

（1）本次流行的情况。最初发病的时间、地点，随后蔓延的情况，目前的疫情分布。疫区内各种畜禽的数量和分布情况、发病畜禽的种类、数量、年龄、性别。查明其感染率、发病率、病死率和死亡率。

（2）疫情来源的调查。本地过去曾否发生过类似的疫病?何时何地?流行情况如何?是否经过确诊?有无历史资料可查?何时采取过何种防治措施?效果如何?如本地未发生过，附近地区曾否发生?这次发病前，曾否由其他地方引进畜禽、畜产品或饲料?输出地有无类似的疫病存在?

（3）传播途径和方式的调查。本地各类有关畜禽的饲养管理方法，使役和放牧情况，牲畜流动、收购以及防疫卫生情况如何？交通检疫、市场检疫和屠宰检验的情况如何？死病畜处理情况如何？有哪些助长疫病传播蔓延的因素和控制疫病的经验?疫区的地理、地形、河流、交通、气候、植被和野生动物、节肢动物等分布和活动情况，它们与疫病的发生及蔓延传播有无关系？

（4）其他方面调查。该地区的政治、经济基本情况，群众生产和生活活动的基本情况和特点，畜牧兽医机构和工作的基本情况，当地领导、干部、兽医、饲养员和群众对疫情的看法如何等。

3．病理学诊断。患各种传染病而死亡的畜禽尸体，大多数具有一定的病理变化，可作为诊断的依据之一，如猪瘟、猪气喘病、新城疫、禽霍乱、牛肺疫时，都有特征性的病理变化，常有很大的诊断价值。有的病畜，特别是最急性死亡的病例和早期屠宰的病例，有时特征性的病变尚未出现，因此进行病理剖检诊断时尽可能多检查几头，并选择症状较典型的病例进行剖检。有些疫病除肉眼检查外，还需作病理组织学检查。有些病，还需检查特定的组织器官，如疑为狂犬病时应取脑海马角组织进行包涵体检查。

4．微生物学诊断。运用兽医微生物学的方法进行病原学检查是诊断家畜传染病的重要方法。一般常用下列方法和步骤：

（1）病料的采集。正确采集病料是微生物学诊断的重要环节。病料力求新鲜，最好能在濒死时或死后数小时内采取，要求尽量减少杂菌污染，用具器皿应尽可能严格消毒。通常可根据所怀疑病的类型和特性来决定采取哪些器官或组织的病料。原则上要求采取病原微生物含量多、病变明显的部位，同时易于采取，易于保存和运送。如果缺乏临诊资料，剖检时又难于分析诊断可能属于何种病时，应比较全面地取材，例如血液、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结等，同时要注意带有病变的部分。如怀疑炭疽，则非必要时不准作尸体剖检，只割取一块耳朵就可以了。

（2）病料涂片镜检。通常在有显著病变的不同组织器官和不同部位涂抹数片，进行染色镜检。此法对于一些具有特征性形态的病原微生物如炭疽杆菌、巴氏杆菌等可以迅即做出诊断，但对大多数传染病来说，只能提供进一步检查的依据或参考。

（3）分离培养和鉴定。用人工培养方法将病原体从病料中分离出来。细菌、真菌、螺旋体等可选择适当的人工培养基，病毒等可选用禽胚、各种动物、组织培养等方法分离培养，分离到病原体后，再进行形态学、培养特性、动物接种及免疫学试验等方法做出鉴定。

（4）动物接种试验。通常选择对该种传染病病原体最敏感的动物进行人工感染试验。将病料用适当的方法进行人工接种，然后根据对不同动物的致病力、症状和病理变化特点来帮助诊断。当实验动物死亡或经一定时间杀死后，观察体内变化，并采取病料进行涂片检查和分离鉴定。

一般应用的实验小动物有家兔、小鼠、豚鼠、仓鼠、家禽、鸽子等，在实验小动物对该病原体无感受性时，可以采用有易感性的大动物进行试验，但费用大，而且需要严格的隔离条件和严格的消毒措施，因此只有在非常必要和条件许可时才能进行。

从病料中分离出微生物，虽是确诊的重要依据，但也应注意动物的“健康带菌”现象，其结果还需与临诊及流行病学、病理变化结合起来进行分析。有时即使没有发现病原体，也不能完全否定该种传染病的诊断。

5．免疫学诊断免疫学诊断是传染病诊断和检疫中常用的重要方法，包括血清学试验和变态反应两类。

（1）血清学试验。利用抗原和抗体特异性结合的免疫学反应进行诊断。可以用已知抗原来测定被检动物血清中的特异性抗体，也可以用已知的抗体（免疫血清）来测定被检材料中的抗原。血清学试验有中和试验（毒素抗毒素中和试验、病毒中和试验等）；凝集试验（直接凝集试验、间接凝集试验、间接血凝试验、SPA协同凝集试验和血细胞凝集抑制试验）；沉淀试验（环状沉淀试验、琼胶扩散沉淀试验和免疫电泳等）；溶细胞试验（溶菌试验、溶血试验）；补体结合试验以及免疫荧光试验、免疫酶技术、放射免疫测定、单克隆抗体和核酸探针等。近年来由于与现代科学技术相结合，血清学试验在方法上日新月异，发展很快，其应用也越来越广，已成为传染病快速诊断的重要工具。

（2）变态反应。动物患某些传染病（主要是慢性传染病）时，可对该病病原体或其产物（某种抗原物质）的再次进入产生强烈反应。能引起变态反应的物质（病原体、病原体产物或抽提物）称为变态原，如结核菌素、鼻疽菌素等，将其注入患病动物时，可引起局部或全身反应。

6．分子生物学诊断。分子生物学诊断又称基因诊断。主要是针对不同病原微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行测定。

（1）PCR技术。又称为体外基因扩增技术。诞生于1985年，美国PE-cetus公司Mullis等人发明，1987年得到美国专利局的专利授权。

PCR技术主要是检测病原，做传染病的早期诊断和传染源的鉴定。传染病的病原体主要有真核生物，原核生物和非细胞型生物（病毒、朊病毒等）三大类。每类病原体都有其特异性的核酸。检测出特异性核酸就能确定致病的微生物，就能确诊是哪种传染病。

（2）核酸探针技术。核酸探针又称为基因探针，核酸分子杂交技术。该方法有三大组成部分：待检核酸（模板）、固相载体（NC硝酸纤维膜或尼龙膜）、用同位素、酶、荧光标记的核酸探针。

（3）DNA芯片技术。该项技术在兽医传染病的诊断上还未见报道。但在人医的传染病诊断上已有研究报道。

最后，通过各种诊断检查，将所获得的资料进行综合分析做出正确诊断。

四、作业掌握传染病的诊断方法。

实训二制定常见畜禽传染病的防制措施

一、目的要求学会独立制定常见畜禽传染病的防制措施。

二、实验内容制定传染病的防制措施。

三、方法与步骤畜禽传染病防制措施的制定，必须贯彻“预防为主”的方针，严格执行国家颁布的动物防疫法。根据本场的实际情况，制定出自己的疫病防制措施。

1．防疫措施。家畜传染病的流行是由传染源、传播途径和易感动物三个因素相互联系而造成的复杂过程。因此，采取适当的防疫措施来消除或切断造成流行的三个因素的相互联系作用，就可以使疫病不能继续传播。针对传染源主要是消除传染源，包括对病原体污染的物体进行消毒；对患畜、可疑患畜及病原携带者采取扑杀、深埋或焚烧处理；对以慢性病原携带者为主的传染源，如患结核病、布氏杆菌病的牛，主要采取定期检疫，阳性牛进行扑杀或送隔离区酌情处理。对传播途径的主要防疫措施是消毒、检疫、隔离和培育SPF动物。对易感畜群的主要防疫措施是增强易感畜群的免疫水平，即通过免疫接种增强畜群对传染病的抵抗力。其次是抗病育种和饲料中添加抗生素药物。但是只进行一项单独的防疫措施是不够的，必须采取包括“养、防、检、治”四个基本环节的综合性措施。综合性防疫措施可分为平时的预防措施和发生疫病时的扑灭措施两方面的内容。现分别简述如下：

（1）平时的预防措施。

①加强饲养管理，搞好卫生消毒工作，增强家畜机体的抗病能力。贯彻自繁自养的原则，减少疫病传播。

②拟订和执行定期预防接种和补种计划。