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第六章 综合技能训练02（第1页）

第六章综合技能训练02

五、作业

1。器械与敷料、畜舍、地面土壤、粪便与污水的消毒方法有哪些?

2。免疫接种的方法有哪些?

3。怎样保存、运送生物制剂？

4。预防接种时注意哪些事项。

实训五新城疫病毒的红细胞凝集

与红细胞凝集抑制试验

一、目的要求掌握新城疫病毒的红细胞凝集和凝集抑制试验（微量法）的原理、操作方法和判定方法。

二、材料与器械96孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、微量振**器、玻璃注射器、离心管、离心机、灭菌生理盐水、1%鸡红细胞悬液、新城疫弱毒疫苗Ⅱ系或Lasota系、新城疫标准阳性血清和阴性血清、被检血清

三、实训内容新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法与判定方法。

四、方法与步骤

1．实验原理。某些病毒（如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与人或动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异性抗体（免疫血清）所抑制，即为红细胞凝集抑制试验。

2．实训内容

（1）红细胞凝集试验（HA试验）。主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数（抗原单位）。有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。

新城疫病毒的HA试验现采用微量法，在V形微量反应板上进行。

①首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一滴（25μl）。

②用微量移液器取病毒抗原液25μl加入第1孔内，吸头浸于**中缓慢吸吹几次使病毒与稀释液混合均匀，再吸取25μl**小心地移至第2孔，如此连续稀释至第11孔，第11孔吸取25μl**弃掉；病毒稀释倍数依为1∶2～1∶2048，第12孔为红细胞对照。

③再以微量移液器每孔加1。0％红细胞悬浮液1滴（25μl）。

④在振**器上振**混匀l～2min，再置37℃作用15min后观察结果。

⑤每次测定样品都应同时做红细胞对照。

表1新城疫血凝效价（HA）的测定术式（微量法）

孔号123456789101112

病毒稀释倍数

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

1:64

1:128

1:256

1:512

1:1024

1:2048

对照

生理盐水25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl

病毒液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl