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第三节 变应原血清学检测方法（第1页）

第三节变应原血清学检测方法

Ⅰ型变应性疾病患者的血清中含有针对其致敏变应原的特异性IgE抗体，即sIgE。变应原血清学检测是检测患者血清中sIgE。sIgE检测是根据免疫学原理测定患者血液对相关变应原的特异性。sIgE检测是变应性疾病的特异性诊断中最重要的检测方法之一，在变应性疾病体外诊断中占有重要地位，逐渐被广泛应用。

新近文献指出，目前所谓“食物不耐受检测（食物sIgG检测）”存在严重概念错误。食物耐受不良是指由于药理作用、中毒、刺激作用、胆盐缺乏及血管活性胺介导的食物不良反应。而免疫机制介导的为食物变态反应，食物进入机体后在生理状态下可通过诱发免疫反应，产生特异性IgG、IgM及IgA，形成抗原-抗体免疫复合物并清除之，而不产生任何不良反应。所谓“食物不耐受检测”检测到的食物sIgG，与食物耐受不良无任何关系，可能为人体的正常生理反应，亦可能为能够介导Ⅲ型食物变态反应的病理性抗体，但该项检测尚不能区别生理性和病理性的食物sIgG抗体。

一、变应原血清学检测方法

目前临**sIgE的检测方法很多，包括ELISA、免疫印迹杂交、放免法等，但国际公认的最佳检测方法为放射性变应原吸附试验（radiosorbe）。由于血中IgE含量甚微，仅为血中IgG的十几万分之一，sIgE含量更少，因此采用一般的免疫学方法并不能检测到sIgE，需采用同位素标记或酶标记的抗人IgE抗体以及固相化的各种变应原所建立标记免疫分析技术进行测定。若待测血清中有针对变应原的sIgE，即可与固相化的变应原形成变应原-sIgE复合物，再加入抗人IgE抗体，最终形成固相化的变应原-sIgE-标记的抗人IgE抗体复合物。若标记物为同位素，则应用γ-计数仪测定结合的同位素活性；若标记物为酶，则通过酶催化底物产生的颜色或发光（包括荧光），再经特定仪器进行检测。

1。特异性IgE（sIgE）检测的优点：①其最大的优点是安全，没有用变应原做皮试时产生的不适感，可避免全身过敏反应发生的可能性；②适用于皮试呈现假阳性的划痕症患者、严重皮炎不能做皮试者以及皮肤反应差的老年人和三岁以下儿童；③不受相关治疗用药的干扰，也不受过敏症状的干扰；④症状较重，不能停用影响皮肤试验结果药物的患者。

2。特异性IgE（sIgE）检测的缺点：①费用较昂贵，需一定设备，操作较复杂，一般需要1d时间才能得出结果；②血清中存在的非IgE抗体，如脱敏治疗过程中所产生的IgG类阻断抗体也可与变应原结合，干扰了IgE抗体与变应原的结合；③不是所有的变应原都适用，如药物和细菌等并不适用；④方法种类繁多，有酶免法、荧光酶免法、化学发光法等。各种方法所采用的固相化变应原的固相载体不同，如96孔塑料板、圆形纸片、微孔薄膜等；所用的结合抗人IgE抗体的酶不同，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、脲素酶等；应用的抗人IgE抗体来源也不同，如单克隆抗体、多克隆抗体等。由于以上差异，以及抗人IgE抗体的亲和力和效价不尽一致，各厂家又备有自己的标准品，因此所得的结果差异可很大，可比性上不够满意，不同公司的商品试剂盒所得结果相互间很难作比较。目前国际上公认荧光酶免法是检测的金标准，其灵敏度、特异度及准确度均较高，但仍不能单纯根据sIgE检测阳性结果做出诊断，特别是食物变态反应。即使是应用国际变态反应学界公认的sIgE检测金标准（PhadiaCAP系统）进行尘螨sIgE检测，sIgE为Ⅱ级0。7kUAL，临**仅有40％的患者能够确诊尘螨过敏。

以上所说的皮肤试验和血清学试验都有一定的局限性，因此，对一些病史和症状体征都比较典型而又查不出致敏原的患者，应重视生活和工作环境情况，从中筛选出引起过敏的物质，患者本身也要详细观察和注意这方面的变化，医生应注意结合病史及变应原检测结果，综合分析做出病因判断。

二、变应原血清学检测方法的评价要点

1。检测原理和方法是否准确可靠：sIgE的检测是变应性疾病体外诊断的核心，目前有一些和IgE毫无关系的检测，也被宣传为是检测变应原的方法，我们认为是缺少科学根据的。

2。敏感性和特异性：由于sIgE的含量甚微，所以需要敏感性（sensitivity）和特异性（specificity）的检测方法。评价敏感性和特异性首先应确定“金标准”，用金标准确诊过敏或不过敏。严格来说，变应原激发试验被认为是唯一的金标准，事实上是很难做到的。目前我们采用的金标准是将临床资料、体内试验和体外试验等多项资料综合评价的方法。敏感性是指检测结果阳性者占确诊对某种物质过敏的总人数的比值。特异性是指检测为阴性者占确诊对某种物质不过敏的总人数的比值。敏感性和特异性是考察检验结果与临床符合程度的两个最重要的指标，通常是敏感性高的特异性低，特异性高的敏感性低。因此，为了综合考虑，应根据敏感性和特异性来计算一致性（agreement）。所谓一致性是指与临床的符合程度。

3。要有较好的重复性：重复性（reproducibility）是指不同检测批次之间（run-run）、不同实验室之间（site-site）、不同操作者之间（operator-operator）、不同时间之间（day-day）的重复性。

4。精密度和准确度：精密度（pre）是评价随机误差的一个指标，可以用变异系数表示。准确度（accuracy）是评价系统误差的一个指标，可以用偏差表示。目前我国的临检中心只能提供总IgE标准品的靶值，所以只能对总IgE进行准确度评定，其偏差计算方法为：

偏差（%）＝（检测值－靶值）靶值×100%

由于国内外都不能提供各种sIgE的靶值，严格来说，目前不能按上述方法评价sIgE的准确度。

5。要为国际变态反应学界认同：变应原检测的方法必须得到国际变态反应学界的认同。通过检索某种检测方法在国际上影响因子较大的变态反应学杂志中出现的频度做出客观评估。

6。是否有质控：包括室内质控和室外质控，无条件做室间质控者应做室间比对。

7。要有较好的性价比，也应有比较成熟的检查程序，以降低检查费用。

8。对于食物变应原，无论是重要的还是次要的，建议均以典型病例报告的形式进行评价。

（关继涛）